三七化学的成分,三七粉的营养成份表
发布时间:2022-05-03 05:03
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三七粉的营养成份表前人对三七的化学成分进行了较为系统的研究。到目前为止,从三七中分离得到的化学成分主要有皂苷、黄酮、挥发油、氨基酸、多糖、淀粉、蛋白质
1,三七粉的营养成份表
前人对三七的化学成分进行了较为系统的研究。到目前为止,从三七中分离得到的化学成分主要有皂苷、黄酮、挥发油、氨基酸、多糖、淀粉、蛋白质等以及部分无机化学成分如氮、磷、钾等大量元素和钴、钼、铯等微量元素。
2,三七含有哪些维生素和矿物质成分
三七含有氨基酸,不饱和脂肪酸,蛋白质,维生素,矿物质等60多种血管中必须的营养成份。长期服用对身体是有百利而无一害的。五谷杂粮,各种水果蔬菜中都含有人体所需要的各种维生素和矿物质,缺一不可,只要不偏食,不挑食,这些都会自然平衡的。如果单问哪些东西里面含有维生素和矿物质,那只能说每一种里面都有不同的维生素和矿物质的。
3,三七的主要成份是不是三七总皂苷
含五加皂甙a,五加皂甙b;葡萄糖等; 五加皂甙a,b;均能刺激血脂及胆固醇的新陈代谢; 还含有一种酮类化合物;能降低血压,扩张冠状动脉,增加冠状动脉血流量,并降低心脏耗血量,减轻心脏工作; 三七及其合剂;主要治疗心绞痛------ 三七所含皂甙,还有使细保核酸中的r,n,a,促进产生蛋白质,增加抗力作用。对乙肝恢复应有帮助。 三七总皂苷是根据提取、分离技术从优质三七中提取有效的药用成分包括20多种皂苷活性物质、17种微量元素、蛋白、丰富的维生素、多糖等 ,三七的主要成份是三七总皂苷。三七的主要化学成分有三七皂苷、黄酮苷等。三七皂苷与人参皂苷相似,为达玛烷系四环三萜皂苷,总皂苷含量可达8%~12%,其中所含单体有人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh等9种,但以Rb1和Rg1为主。三七总皂苷(PNS)水解所得苷元为人参二醇和人参三醇,但因无齐墩果酸而与人参不同。此外还含有绞股蓝苷Ⅶ、Ⅹ,人参炔三醇。黄酮苷中有三七黄酮A(槲皮素)、三七黄酮B。止血有效成分为三七氨酸。三七氨酸的旋光异构体也有止血活血性,但含量甚微。
4,三七的主要成分是什么
三七伤药颗粒的主药成分是田七,又名三七,有活血止血的功效。医生开的是口服药,如果配合云南白药气雾剂喷伤处,内服外用双管齐下,效果会更好。到目前为止,从三七中分离得到的化学成分主要有皂苷、黄酮、挥发油、氨基酸、多糖、淀粉、蛋白质等以及部分无机化学成分如氮、磷、钾等大量元素和钴、钼、铯等微量元素。三七化学成分
1.挥发性成分
2.皂甙成分
3.从三七中分离到止血活血成分
4.其它成分三七还含16种氨基酸。
化学成分:该品主要含皂苷、黄酮苷、氨基酸等。止血活性成分为三七氨酸。
三七药理作用
三七具有散瘀止血,消肿定痛之功效。主治咯血,吐血,衄血,便血,崩漏,外伤出血,胸腹刺痛,跌仆肿痛。《本草纲目》云:“三七止血,散血,定痛。”《玉楸药解》云:“三七和营止血,通脉行瘀,行瘀血而敛新血。”
该品能够缩短出血和凝血时间,具有抗血小板聚集及溶栓作用;能够促进多功能造血干细胞的增殖,具有造血作用;能够降低血压,减慢心率,对各种药物诱发的心律失常均有保护作用;能够降低心肌耗氧量和氧利用率,扩张脑血管,增强脑血管流量;能够提高体液免疫功能,具有镇痛、抗炎、抗衰老等作用;能够明显治疗大鼠胃黏膜的萎缩性病变,并能逆转腺上皮的不典型增生和肠上皮化生,具有预防肿瘤的作用。三七又名田七,为伞形目五加科植物。中药材三七是以其根部作为药用部分,具有散瘀止血,消肿定痛之功效。主治咯血,吐血,衄血,便血,崩漏,外伤出血,胸腹刺痛,跌仆肿痛。
5,三七成分和功用
三七不管是对止血化瘀和我们的心脑血管都有不错的帮助。你好:1,硫磺皂可以消炎杀菌,不可以消毒。主要用于皮肤的消炎杀菌。2,可以祛痘。但要有耐心。3主要成分:脂肪酸钠、硫磺、色素、香精、抗氧螯合剂、甘油等。4,副作用是 刚开始用的时候,皮肤会因为被硫磺侵袭造成脱皮现象,用几次之后会消失。
编辑:娓娓三七也就是通常人们所说的田七,三七别名较多,有金不换、人参三七、南国神草等,为五加科植物三七的根,全株皆可入药,以三七的主根药用价值最高,茎叶药用价值最次(市场上基本不流通,都是进入药厂,提取有效成分),三七的功效主要是针对血液方面的,具有止血化瘀、活血养血的双向调节作用,有止血不留淤、活血不伤新血的特点。
三七的功效与作用1.对血液和造血系统的作用
三七具有良好的止血功效,能明显缩短出血和凝血时间;能促进各类血细胞分裂生长、增加数目,具有显著补血功效;具有活血化瘀、去瘀生新的明显疗效。
三七的功效与作用2.对心血管系统的作用
三七在明显扩张血管、减低冠脉阻力、增加冠脉流量、加强和改善冠脉微循环、增加营养性心肌血流量的同时,能降低动脉压,略减心率,使心脏工作量减低,从而明显减少心肌的耗氧量,可治疗心肌缺血、心绞痛及休克。
三七的功效与作用3.对神经系统的作用
三七地上部份对中枢神经有抑制作用,表现为镇静、安定与改善睡眠等功用;地下部分能兴奋中枢神经,提高脑力和体力,表现出抗疲劳性;其各个部分均有利于增强记忆能力,并有明显镇痛作用。
三七的功效与作用4.田七对免疫系统的功用
田七(三七)总皂苷可显著提高巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,提高外围血中白细胞总数,减少白细胞的移动指数,田七具有一定的免疫调节作用。
三七的功效与作用5.对物质代谢的影响
6,三七粉含哪15种元素
三七块根含总皂苷约12%,一般认为是三七的主要药理活性成分。现从三七各部位分离得到20种达玛烷(Dammarane)型皂贰。根据皂贰酸液加热水解后产生次皂贰元结构的不同,可分成人参皂贰(gln犹noside)Rg、Rb、Rc三种类型。三七中Rg型皂贰包括人参皂贰R9l、 Rg2、 Re、 Rh, 三七皂贰 (notog5nsenoside)RhR。、R3、R6,次皂贰元均为人参三醇(panaxa颠01);Rb型皂贰包括人参皂成肋?☆Rb2、Rbl、Rc、Rd、F1.二亡皂贰Fa、Fc、Fe、Rd,次皂贰元均为人参二醇(PanaxadioU;Ro型皂贰为齐敦果烷(0Ieanane)型衍生物,水解后可得到齐敦果酸(01eano比acZd);但三七告部位均未分离出Ro型皂贰。
二七根中Rg型与肋型皂贰的比率为100:75。三七叶、三七花中以Rb型皂贰较多,Rg型皂贰含量极少。三七根中除含有皂贰外, 尚含有少量三七黄酮A(椒皮素)。含量更少的黄酮醇贰一三七黄酮B,其贰元亦为栅皮素。此外还含有少量挥发油,主要成分为卜榄香烯(A—elemene)、d一雪松烯(d—cedrene)、d一珐巴烯(d寸opaene)等8种倍半蔽烯成分。另外还含有生物碱、A一谷醇,胡萝L赋,止血作用的氨基酸一卜草酰基一L—a,A一二氨基丙酸(denejchlne)、蔗糖、多糖等。
L活中的无机元素,无论是常量元素还是微量元素都是对人体有重要的生理作用的物质。随着分子生物学、临床化学的发展,微量元素在人体内和各种生物体内的作用越来越受到医药界、生物化学界的重视,如锌(zn)、锰(Mn)、铜(Cu)已被称作生命悠关的元素。有些元素是体内重要物质的原料,如碘(I)是甲状腺激素的原料;钻(C。)是维生素B1:的原料;铁(Fe)、锌(Zn)、锰(Mn)、钢(Mo)则是酶和其它活性蛋白质的原料。这些微量元素是机体必需的营养素。缺乏这些微量元素会引起特殊的元素缺乏症。如果人体内缺乏Fe则会导致低色素贫血症;如果缺乏CM会造成低色素小细胞贫血、脱发,骨筋生成障碍发生骨质疏松;缺乏zn则产生生长迟缓、食欲不振、宰九痉缩、皮肤变性;缺乏锰(Mn)儿童骨质停止生长,肌腿结缔组织发育不全,成年人食欲不振,体重下降,发育不良,生殖功能低下,脂肪与蛋白质代谢障碍,甚至出现精神症状;缺乏Mn还与动脉硬化、心肌梗塞有密切关系,补充适量的Mn可以改善其病理过程。三七是补充和治疗这种元素缺乏症的重要药物之一。
近年来,吉林农业大学特产系李向高等人,分别用活化分析法和原于吸收分光光度法,测定了三七中所含元素及其含量,证明三七含有15种微量元素。是一种人体需要的微量元素,你可以通过食物补充。
日常生活中含较多的食物有海味品、肉类(特别是动物的肾脏)以及大米、谷类等。
7,三七粉的成分有哪些
三七粉的成分主要是植物三七的根茎部分,“三七粉”是植物三七(学名:Panax pseudo-ginseng)的根茎制品,是用三七主根打成的粉,是盘龙云海的主要成分。别名:田七粉,金不换。产自于云南文山州,故名文山三七又名文州三七,性温,味甘微苦,入肝、胃、大肠经。有称北人参,南三七。人参补气第一,三七补血第一。1、三七总皂苷:皂苷是三七主要有效活性成分,也是目前研究较为系统的化学物质。迄今为止,已从三七的不同部位分离得到54种单体皂苷成分,这些单体皂苷成分大多数为达玛烷型的20(S)—原人参二醇型和20-(S)原人参三醇型。三七的地下部分既有20(S)—原人参二醇型皂苷,也含20(S)原人参三醇型皂苷。三七的地上部分以20(S)—原人参二醇型皂苷为主。
药效:三七皂苷的主要功效是活血化淤、疏通经脉,也正是皂苷所起的作用,还有辅助美白祛斑作用。
2、黄酮类化合物:黄酮类化合物是三七有效活性成分之一。目前从三七分离得到的有三七黄酮A和三七黄酮B2种。
药效:降低血管的脆性,及改善血管的通透性、降低血脂、胆固醇和改善血液微循环,用于防治老年高血压和脑溢血等心脑血管疾病。
3、三七素:1981年日本科学家从三七中发现了具有止血活性的成分,命名为三七素。它其实是一种特殊的氨基酸。,人参属的几种重要中药均含有止血成分三七素,但以三七中含量最高(0.90%),人参次之(0.50%),西洋参最低(0.31%)。
药效:止血,三七的止血功效就是三七素起作用
4、糖类成分:糖和它的衍生物在自然界中广泛存在。三七中含有鼠李糖、木糖和葡萄糖,低聚糖和多糖。1985年,日本科学家水谷先生等首先从三七中得具有增强机体免疫功能效用的活性多糖(2A-1),1987年,还是日本科学家大谷等又从三七中分离到了一种多糖成分,命名为三七多糖A( Sanchinan)—A(SA)。
药效:抗衰老,抗疲劳,增强免疫力
5、氨基酸成分:三七粉含有19种以上的氨基酸,有8种人体必需的氨基酸。
药效:抗疲劳,增强免疫力
6、挥发油:我国科学家鲁歧等从三七挥发油总油中分离鉴定出34种化合物,主要是酮烯烃环烷烃倍半萜类脂肪酸酯苯取代物萘取代物。之后,帅绯等又从三七花中从分离鉴出了24种挥发油成分。
药效:清除自由基,美容的作用,还有三七中的挥发油对大脑延髓有抑制作用,镇静安神,其中的β—榄香烯有抗癌作用。
7、其他有效成分三七除了以上介绍的化学成分外,还含有植物油脂、甾醇和炔、烯、烃类化合物等化学物质。
8、科学家从三七根、三七花、果实中均分得了β-谷甾醇,β-谷甾醇具有降血脂及抗皮肤溃疡等作用。
9、杨平等(1993)从三七根的脂溶性部分分离到一个炔烯烃类化合物,人参炔三醇(panaxytriol)。药理研究表明,该化合物具有较强的防癌和抗癌作用。三七粉的成分和三七主根一样,富含三七皂苷、三七多糖、三七素、黄酮有效成分,具有止血、活血化瘀、消肿定痛、滋补强壮、抗疲劳、耐缺氧、抗衰老、降血脂、降血糖、提高机体免疫功能等作用。1、扩张血管、降低血压,改善微循环,增加血流量,预防和治疗心脑组织缺血、缺氧症
三七能扩张心、脑组织血管,在降低血压的同时增加心脏冠状动脉和脑血管的 血流量,改善心、脑组织的血液微循环,明显提高对心、脑组织细胞的供氧能力,有效预防和治疗心、脑组织器官缺血、缺氧病症。此外,三七还能降血脂、降胆固醇、抑制动脉 硬化
2、促进蛋白质、核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)合成,强身健体
3、促进血液细胞新陈代谢,平衡调节血液细胞
4、双向调节中枢神经,提高脑力,增强学习和记忆能力三七粉是用三七主根打成的粉。三七粉的成分和三七主根一样,富含三七皂苷、三七多糖、三七素、黄酮有效成分,具有止血、活血化瘀、消肿定痛、滋补强壮、抗疲劳、耐缺氧、抗衰老、降血脂、降血糖、提高机体免疫功能等作用。
8,三七的成分是什么请问做其主要有效成分最适合的的方法如果用
高效液相色谱仪操作步骤: 1). 过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。 2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3). 打开hplc工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。 4). 进入hplc控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。 5). 有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6). 调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。 7). 设计走样方法。点击file,选取select users and methods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击new method。选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。一个完整的走样方法需要包括:a.进样前的稳流,一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间,随不同的样品而不同。 8). 进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。 9). 关机时,先关计算机,再关液相色谱。 10). 填写登记本,由负责人签字。三七含量测定
取本品粉末(过三号筛)0.5克,精密称定,置索氏提取器中,加乙醚适量,加热回流1小时,弃去乙醚液,药渣挥去乙醚,置于索氏提取器中,加甲醇适量,加热提取至甲醇无色,取甲醇提取液,挥干,残渣加甲醇使溶解,定量转移至20毫升量瓶中,加甲醇到刻度,摇匀,作为供试品溶液。另取人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1对照品适量精密称定,加甲醇制成每1毫升各含0.5毫克的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法试验,精密吸取供试品溶液2微升,对照品溶液2微升与4微升,分别交叉点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿—甲醇—水(13:7:2)10摄氏度以下放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在110摄氏度加热至斑点显色清晰,取出,在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板,周围用胶布固定,照薄层色谱法进行扫描,测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值,计算,即得。
本品含人参皂苷Rb1(C54H92023)和人参皂苷Rg1(C42H72O14)的总量不得小于3.8%。
三七 Radix Notoginseng
(英)Sanchi
别名 人参三七、田七、盘龙七、金不换。
来源 为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.) F.H.Chen的根。
植物形态 多年生草本,高达60cm。根茎短,茎直立,光滑无毛。掌状复叶,具长柄,3~4片轮生于茎顶;小叶3~7,椭圆形或长圆状倒卵形,边缘有细锯齿。伞形花序顶生,花序梗从茎顶中央抽出,长20~30cm。花小,黄绿色;花萼5裂;花瓣、雄蕊皆为5。核果浆果状,近肾形,熟时红色。种子1~3,扁球形。花期6~8月,果期8~10月。
生于山坡丛林下。现多栽培于海拔800~1000m的山脚斜坡或土丘缓坡上。主产云南、广西、四川。
采制 种后第3年冬季及夏末初秋采挖。去须根,曝晒至半干,用于搓揉,再曝晒,重复数次,置麻袋中加蜡打光。
性状 根圆锥形、纺锤形或不规则块状,长1.5~5cm,直径1.2~2cm。表面灰黄色或棕黑色,具蜡样光泽,有不规则细纹及少数横长皮孔;上部有数瘤状隆起的支根断痕,顶端残留根茎基。质坚实,击碎后皮部与木部常分离;横切面灰白色或黄棕色,皮部有棕色小点(树脂道),味苦、微甜。
化学成分 含皂甙,主要为人参皂甙Rb1、Rg1 、Rg2和少量人参皂甙Ra、Rb2、Rb和Re。此外,尚含黄酮甙、淀粉、蛋白质、油脂等。
性味 性温,味甘、微苦。
功能主治 散瘀止血,消肿定痛。用于各种内、外出血,胸腹刺痛,跌扑肿痛。
三七种植过程和种植要求
三七是一种十分娇嫩的植物,需要在人工搭建的荫棚下生长,对光的需求仅为自然光强的10~20%,对水分的要求也很苛刻,不能过多,也不能过少。因此,在长达3年的生长过程中,更需要人们的精心管理和细心呵护。稍不留神就会全军覆没,颗粒无收。为此,文山州专门成立了文山州三七研究所来对其进行专门的研究,了解它们的脾气,研究保护它们顺利成长的方法。在三七栽培过程中,人们需要经过选地、整地、播种、定植、施肥、防治各种病虫害等一系列的管理,才能获得丰收的喜悦。三七种植过的土地要经过10年以上的轮作才能再进行种植。 [采收]经过3年漫长的时间,三七终于可以收获了。三七最佳的收获时间每年的9~11月,也就是中秋节前后。这段时间采收的三七产量高,质量好。根据文山州三七研究所专家们的研究结果,9~11月三七中的总皂苷、三七素、黄酮和多糖等活性成分均上一年中含量最高的。 三七采收后必须立刻进行初加工。加工方法是在洁净的地方,摘除地上茎,洗净泥土,剪去根茎、支根和须根。然后进行晾晒或50~55℃衡温烘烤,然后进行手工揉搓,修剪、分级、检测、包装。
9,三七中含哪些氨基酸成分
一般来说人体必须的17种氨基酸,也较为重视
氨基酸的定性测定
一、氨基酸的一般显色反应
本节介绍三种显色反应:茚三酮法、吲哚醌法和邻苯二甲醛法。前二种是经典的常用显
色法,后一种是近年来发展起来的荧光显色法,具有灵敏度高的特点。
1. 茚三酮法
显色方法有下列数种:
①常用法:将点有样品的层析或电泳完毕的滤纸充分除尽溶剂,用 5g/l 茚三酮无水丙
酮溶液喷雾,充分吹干,置65℃烘箱中约30min(温度不宜过高,避免空气中氨,以免背
景泛红色),氨基酸斑点呈紫红色。
为了使各种氨基酸呈现不同颜色,可用下列方法:
②用 0.4g 茚三酮,10g 酚和90g 正丁醇的混合液显色。
③用 1g/l 茚三酮无水丙酮溶液显色完毕后,再用盐酸蒸汽熏1min。
④用 1g 茚三酮,600ml 无水乙醇,200ml 冰醋酸及80ml2,4,6-三甲基吡啶混合液80
℃染色5~10min。
为了使显色稳定,可用下列方法:
⑤配制含醋酸镉 2g 加蒸馏水200ml 及冰醋酸40ml 的贮存液。将上述贮存液加200ml
丙酮及2g 茚三酮,即为显色液。点有样品的滤纸上浸有此显色液后,放置于盛有一小杯浓
硫酸的密闭玻璃容器中,25℃,18h,或较高温度下适当缩短时间。背景色浅,氨基酸斑点
也比较稳定。
⑥用含 2g/lcocl2(或cuso4)的4g/l 茚三酮异丙酮溶液显色时,氨基酸斑点呈红色,也
可在茚三酮显色后喷以含钴、镉或铜等无机离子的异丙醇溶液,斑点自蓝紫色变成红色。
2.吲哚醌法
(1)原理
各种氨基酸与吲哚醌试剂能显示不同颜色,因此可借此辩认氨基酸。氨对吲哚醌显色没
有妨碍,但其灵敏度较茚三酮法稍差,显色不稳定,颜色只有在绝对干燥的环境中才能保存。
(2)试剂
①显色剂:1g 吲哚醌溶于100ml 乙醇及10ml 冰醋酸中(若冰醋酸用量减少则灵敏度
稍差)。
②底色褪色剂:在 100ml 200g/l 碳酸钠溶液中加入60g 硅酸钠(na2sio3?9h2o)在水
浴(60~70℃)中加热搅拌直至完全溶解,待溶液比较清澈为止。在溶解过程中,有时硅酸
钠会结成凝胶,此时只需继续搅拌即可溶解。配制时若硅酸钠用量多则褪色较快,但背景容
易变黄,硅酸钠用得少(40g),虽裉色较慢,但背景较为洁白。
显色步骤
层析或电泳后滤纸烘干后,仔细喷上或涂上显色剂,用电吹风迅速吹干,待醋酸气味不
太刺鼻时移置100℃烘箱烘5~15min,直至显色为止(温度不要太高,以免引起减色)注
意观察所显出的颜色,然后均匀地涂上底色褪色剂,纸的背景即由黄色变为绛红而后逐渐变
浅,待黄色背景几乎褪尽时,迅速用电吹风吹干,并随时观察颜色的变化。例如苏氨酸在褪
色前为浅红带褐色,褪色后则呈橙黄色或黄色:脯氨酸在褪色前为蓝色,吹干时很快褪成无
色。室温较低时,底色褪色很慢,此时可将褪色剂加温到30~40℃。温度过高也不宜,因
氨基酸斑点的褪色速度也同时加快,应该避免。
其他显色步骤:显色剂为 1g 吲哚醌,1.3g 醋酸锌溶解于70~80ml 热异丙醇中,冷却
后加1ml 吡啶。或者1g 吲哚醌,1.5g 醋酸锌溶解于95ml 热异丙醇中,加3ml 水,冷却
后加1ml 冰醋酸。点有样品的滤纸仔细喷以显色剂后,80~85℃放置10min,背景可用水
迅速浸洗去而不使氨基酸斑点退去
由于吲哚醌试剂配制方法不同,对同一种氨基酸所显颜色往往也有差异。
3.邻苯二甲醛法
邻苯二甲醛法是目前纸上层析、硅胶薄层层析荧光显色氨基酸最灵敏的方法之一,也可
用于氨基酸溶液定量,并推广应用于乙内酰苯硫脲氨基酸、多肽和蛋白质的检出和定量。根
据文献报道,氨基酸纸上层析灵敏度达0.5μmol,在硅胶薄层层析上为0.05~0.2μmol。
这里介绍在纸上层析显现氨基酸方法。(荧光胺是另一种常用的荧光试剂,由于荧光胺来源
比较困难,这里未作介绍)
(1)原理
邻苯二甲醛在 2-巯基乙醇存在下,在碱性溶液中与氨基酸作用产生荧光化合物,最适
的激发光和发射光波长分别为340nm 和455nm。
各种氨基酸显现的荧光强度不同,其相对荧光强度由大到小大致顺序如下:天门冬氨酸,
异亮氨酸,甲硫氨酸,精氨酸,组氨酸,亮氨酸,丝氨酸,缬氨酸,谷氨酸,苏氨酸,甘氨
酸,色氨酸,丙氨酸,苯丙氨酸,赖氨酸,酪氨酸,nh3,脯氨酸和半胱氨酸。
(2)试剂
邻苯二甲醛显色液:取0.1g 邻苯二甲醛,0.1mg 巯基乙醇,1ml 三乙胺,加丙酮+石油
醚(60℃~90℃)(1+1)的混合溶剂至100ml。放置0.5h 后使用。
显色步骤
将含有氨基酸样品的滤纸浸入邻苯二甲醛显色液中 1min,冷风吹干,在温度18℃以下,
湿度50%~90%之间显色0.5h,于紫外灯下观察荧光点。
说明
在滤纸上显现氨基酸时,邻苯二甲醛浓度以 0.1%为宜。显色时必须有一定的湿度,以
便氨基酸溶解,提高分子碰撞机率,并使极性基团解离,促进反应趋于完全。湿度太低,显
不出荧光。温度对显现的荧光延时有显著影响,温度高荧光延时短,温度低荧光延时长。
二、个别氨基酸的显色反应
利用个别氨基酸与某些试剂具有特殊的显色反应定性氨基酸。可应用于纸层析和纸电
泳显色,也可单独应用。方法很多,仅将常用的方法介绍如下:
1.精氨酸的显色——坂口(sakaguchi)反应
(1)第一种方法
试剂:①5g 尿素溶解于100ml0.1g/lα-萘酚乙醇中。使用前,每100ml 加约5g koh。
②0.7ml 溴水溶解于100ml 5%naoh 中。
显色步骤:在点有样品的滤纸上喷试剂①后,在空气中吹几分种,再喷试剂②。精氨
酸或含精氨酸的多肽显红色。此试剂对含精氨酸的蛋白质也适用。
(2)第二种方法:
试剂:①1g/l 8-羟基喹啉的丙酮溶液。②0.02ml 溴水溶解于100ml 0.5mol/lnaoh 溶
液中。
显色步骤:将点有样品的滤纸烘干后,喷上试剂①,吹干后,再喷试剂②。精氨酸或
其他胍类物质显桔红色。
2.胱氨酸和半胱氨酸的显色
试剂:①1.5g 亚硝基铁氰化钠(na2fe(cn)5no2?5h2o)溶于5ml 2mol/l h2so 4 溶液
中,加95ml 甲醇。此时会有沉淀产生,可保存一个月以上。使用时在每100ml 上述溶液
中加10ml 28%氨水,过滤除去沉淀,清液仅能保持一天左右。②2g 氰化钠溶于5ml 水中,
然后加95ml 甲醇。此时有沉淀产生,使用时只需摇匀即可。
显色步骤:半胱氨酸的显色:在滤纸上喷以试剂①的清液,5min 后半胱氨酸显红色。
胱氨酸的显色:先将滤纸浸入试剂②,迅速取出,稍等片刻再喷试剂甲的清液,5min 后胱
氨酸显红色。也可以把试剂②配制的浓度增加一倍,在显色前混和,再喷到滤纸上。
3.甘氨酸的显色
试剂;0.1g 邻苯二甲醛溶于100ml 77%乙醇中。
显色步骤:点有样品的滤纸喷上试剂,甘氨酸显墨绿色,在汞灯(365nm)下显巧克力
棕色。吲哚醌显色后,再用此试剂仍有效。以甘氨酸为n 端的小肽也能显色,但其n 端被
保护后,以及其他氨基酸均不显色。
4.脯氨酸的显色
试剂:1g 吲哚醌和1.5g 醋酸锌,1ml 醋酸,5ml 蒸馏水混和,再加入95ml 异丙醇。
新鲜配制。
显色步骤:层析滤纸除尽溶剂,喷上以上试剂,80℃~85℃烘箱内放置30min,脯氨酸
显蓝色,再以30℃温水漂洗除去多余的试剂后,背景为白色或浅黄色。
也可剪下脯氨酸斑点,在试管中加入5ml 水饱和酚,在黑暗中洗脱15min,间歇振摇,
于610nm 测定其吸光度。从已知标准曲线即可求得样品内脯氨酸含量,测定范围5~20μg。
5.丝氨酸和羟赖氨酸的显色
试剂:①0.035mol/l 过碘酸钠(748mgnaio4 溶于数毫升甲醇中,加2 滴6mol/l 盐酸,
再用甲醇稀释至100ml)。②15g 醋酸铵加0.3ml 冰醋酸,加1ml 乙酰丙酮,用甲醇稀释到
100ml。
显色步骤:点有样品的滤纸吹干,先喷试剂①,近干后再喷试剂②,室温放置 2h,紫
外灯下照射0.5h,丝氨酸和羟赖氨酸呈黄色斑点,在紫外线下都有荧光。
6.羟脯氨酸的显色
试剂:①1g 吲哚醌溶于100ml 乙醇及10ml 冰醋酸。②1g 对二甲胺苯甲醛溶于100ml
的丙酮浓盐酸(9+1)混合液中。(此试剂不稳定,隔数日后溶液颜色增深发黑,灵敏度降
低,故用时新鲜少量配制。
显色步骤:将待鉴定的溶液点于小方块纸上,干后先点上试剂①,热风吹干。这时纯
羟脯氨酸呈墨绿色,纯脯氨酸呈深蓝色(极灵敏),对其他氨基酸呈程度不同的紫红色(不
太灵敏);然后再点上试剂②吹干,如溶液中含有羟脯氨酸即转变为玫瑰红色,而其他氨基
酸与吲哚醌所生成的颜色则褪去。
7.色氨酸的显色
(1)第一种方法
试剂:1g 对二甲氨基苯甲醛加90ml 丙酮,10ml 浓盐酸。新鲜配制。
显色步骤:点有样品的滤纸干燥后,喷上以上试剂,在室温下放置几分钟后,色氨酸
显蓝色或紫红色。茚三酮显色后,仍可使用本法。
(2)第二种方法:
试剂:10ml 35%甲醛加10ml25%盐酸,20ml 无水乙醇。
显色步骤:点有样品的滤纸喷上以上试剂后,100℃烘5min,色氨酸在长波长紫外光下
呈现荧光(黄-橙-带绿色)。
8.酪氨酸的显色
试剂:①0.1%α-亚硝基β-萘酚的95%乙醇溶液。②10%硝酸水溶液。
显色步骤:点有样品的滤纸喷上试剂①后,吹干,再喷试剂②,然后在100℃烘3min,
酪氨酸或含酪氨酸的多肽在浅灰绿色的背景上显红色,0.5h 后转变为桔红色,其后渐退去。
灵敏度1~2μg 酪氨酸。茚三酮显色后,再用此试剂处理,仍能显色,茚三酮所显出的紫红
色斑点变成红色。
9.酪氨酸和组氨酸的显色——pauly 反应
试剂:①4.5g 对氨基苯磺酸与45ml 12mol/l 盐酸共热溶解,以蒸馏水稀释至500ml。
用时取出30ml,在0℃与等体积的5%亚硝酸钠水溶液相混合。(室温放置太长会失效)
②10%碳酸钠水溶液。
显色步骤:点有样品的滤纸上喷试剂①,片刻后再喷试剂②。组氨酸及含组氨酸的多
肽显桔红色;酪氨酸及含酪氨酸的多肽显浅红色。
第六节 氨基酸定量测定
一、氨基酸的一般定量测定
(一)甲醛滴定法
1.原理
氨基酸具有酸性的-cooh 基和碱性的-nh2 基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内
盐。当加入甲醛溶液时,-nh2 基与甲醛结合,从而使其碱性消失。这样就可以用标准强碱
溶液来滴定-cooh 基,并用间接的方法测定氨基酸总量。反应式(有三种不同的推论)如
下:
2.方法特点及应用
此法简单易行、快速方便,与亚硝酸氮气容量法分析结果相近。在发酵工业中常用此
法测定发酵液中氨基氮含量的变化,来了解可被微生物利用的氮源的量及利用情况,并以此
作为控制发酵生产的指标之一。脯氨酸与甲醛作用时产生不稳定的化合物,使结果偏低;酪
氨酸含有酚羧基,滴定时也会消耗一些碱而致使结果偏高;溶液中若有铵存在也可与甲醛反
应,往往使结果偏高。
3.操作方法
吸取含氨基酸约 20mg 的样品溶液于100ml 容量瓶中,加水至标线,混匀后吸取20.0ml
置于200ml 烧杯中,加水60ml,开动磁力搅拌器,用0.05mol/l 氢氧化钠标准溶液滴定至
酸度计指示ph8.2,记录消耗氢氧化钠标准溶液ml 数,供计算总酸含量。
加入10.0ml 甲醛溶液,混匀。再用上述氢氧化钠标准溶液继续滴定至ph9.2,记录消
耗氢氧化钠标准溶液毫升数。
同时取 80ml 蒸馏水置于另一200ml 洁净烧瓶中,先用氢氧化钠标准溶液调至ph8.2,
(此时不计碱消耗量),再加入10.0ml 中性甲醛溶液,用0.05mol/l 氢氧化钠标准溶液滴定
至ph9.2,作为试剂空白试验。
4.结果计算
氨基酸态氮质量分数(%)=
式中:v1——样品稀释液在加入甲醛后滴定至终点(ph9.2)所消耗氢氧化钠标准溶液
的体积,ml;
v2——空白试验加入甲醛后滴定至终点所消耗的氢氧化钠标准溶液的体积,ml;
c——氢氧化钠标准溶液的浓度,mol/l;
m——测定用样品溶液相当于样品的质量,g;
0.014——氮的毫摩尔质量,g/mmol。
5.说明
①本法准确快速,可用于各类样品游离氨基酸含量测定。②浑浊和色深样液可不经处
理而直接测定。
(二)茚三酮比色法
1.原理
氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用,生成蓝紫色化合物(除脯氨酸外均有此反应),
可用吸光光度法测定。
该蓝紫色化合物的颜色深浅与氨基酸含量成正比,其最大吸收波长为 570nm,故据此
可以测定样品中氨基酸含量。
2.操作方法
(1)标准曲线绘制
准确吸取 200μg /ml 的氨基酸标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml(相当于
0、100、200、300、400、500、600μg 氨基酸),分别置于25ml 容量瓶或比色管中,各加
水补充至容积为4.0ml,然后加入茚三酮溶液(20g/l)和磷酸盐缓冲溶液(ph 为8.04)各
1ml,混合均匀,于水浴上加热15min,取出迅速冷至室温,加水至标线,摇匀。静置15min
后,在570nm 波长下,以试剂空白为参比液测定其余各溶液的吸光度a。以氨基酸的微克
数为横坐标,吸光度a 为纵坐标,绘制标准曲线。
(2)样品测定
吸取澄清的样品溶液 1~4ml,按标准曲线制作步骤,在相同条件下测定吸光度a 值,
用测得的a 值在标准曲线上可查得对应的氨基酸微克数。
3.结果计算
氨基酸含量(mg/100g)=
式中:c——从标准曲线上查得的氨基酸的质量数,μg;
m——测定的样品溶液相当于样品的质量,g。
4.说明及注意事项
①通常采用的样品处理方法为:准确称取粉碎样品 5~10g 或吸取样液样品5~10ml,
置于烧杯中,加入50ml 蒸馏水和5g 左右活性炭,加热煮沸,过滤,用30~40ml 热水洗
涤活性炭,收集滤液于100ml 容量瓶中,加水至标线,摇匀备测。
②茚三酮受阳光、空气、温度、湿度等影响而被氧化呈淡红色或深红色,使用前须进行
纯化,具体操作可参阅黄伟坤等编著《食品检验与分析》。
(三)非水溶液滴定法
1.原理
氨基酸的非水溶液滴定法是氨基酸在冰醋酸中用高氯酸的标准溶液滴定其含量。根据酸
碱的质子学说:一切能给出质子的物质为酸,能接受质子的物质为碱;弱碱在酸性溶剂中碱
性显得更强,而弱酸在碱性溶剂中酸性显得更强,因此本来在水溶液中不能滴定的弱碱或弱
酸,如果选择适当的溶剂使其强度增加,则可以顺利地滴定。氨基酸有氨基和羧基,在水中
呈现中性,而在冰醋酸中就能接受质子显示出碱性,因此可以用高氯酸等强酸进行滴定。
本法适合于氨基酸成品的含量测定。允许测定的范围是几十毫克的氨基酸
2.测定
(1)直接法(适用于能溶解于冰醋酸的氨基酸):精确称取氨基酸样品50mg 左右,溶解
于20ml 冰醋酸中,加2 滴甲基紫指示剂,用0.100mol/l 高氯酸标准液滴定(用10ml 体积
的微量滴定管),终点为紫色刚消失,呈现蓝色。空白管为不含氨基酸的冰醋酸液,滴定至
同样终点颜色。
(2)回滴法(适用于不易溶解于冰醋酸而能溶解于高氯酸的氨基酸):精确称取氨基酸样
品30~40mg 左右,溶解于5ml0.1mol/l 高氯酸标准溶液中,加2 滴甲基紫指示剂,剩余的
酸以醋酸钠溶液滴定,颜色变化由黄,经过绿、蓝至初次出现不褪的紫色为终点。
3.说明
(1)能溶解于冰醋酸的氨基酸,可以用直接法测定的有:丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、组
氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和苏氨酸。不易溶解于冰
醋酸,但能溶解于高氯酸可以回滴法测定的有:赖氨酸、丝氨酸、胱氨酸和半胱氨酸。
(2)谷氨酸和天冬氨酸在高氯酸溶液中也不能溶解,可以将样品溶解于2ml 甲酸中,再
加20ml 冰醋酸,直接用标准的高氯酸溶液滴定。
(四)邻苯二甲醛法(opt 法)
1.原理
邻苯二甲醛在 2-巯基乙醇存在下,于碱性溶液中与氨基酸作用产生荧光化合物,最适
的激发光和发射光波长分别为340 和455nm。可能产物为:
各种氨基酸显现的荧光强度不同,其相对荧光强度由大到小大致顺序如下:天门冬氨酸,
异亮氨酸,甲硫氨酸,精氨酸,组氨酸,亮氨酸,丝氨酸,缬氨酸,谷氨酸,苏氨酸,甘氨
酸,色氨酸,丙氨酸,苯丙氨酸,赖氨酸,酪氨酸,nh3,脯氨酸,和半胱氨酸。
本法可用于测定游离氨基酸的含量。灵敏度较茚三酮法约高 100 倍以上,可测到0.1~
1×10-4mol 氨基酸。如用于血清中α-氨基氮的测定,每次血清用量只需5~10μl。与另一
种荧光试剂(萤光胺)一样,空白无荧光,只有与氨基酸结合才产生荧光。缺点是与脯氨酸
不产生荧光,邻苯二甲醛与半胱氨酸荧光值太低。荧光胺已有用于氨基酸自动分析定量分析,
但由于试剂昂贵及个别氨基酸反应不满意,目前还未普遍应用。
(五)三硝基苯磺酸法
三硝基苯磺酸(tnbs)是定量测定氨基酸的重要试剂之一。tnbs 在偏碱性的条件下
与氨基酸反应,先形成中间络合物,如下式所示:
中间络合物在光谱上有二个吸收值相近的高峰,分别位于355nm 和420nm 附近。然
而溶液一旦酸化,中间络合物转化成三硝基苯-氨基酸(tnp-氨基酸),420nm 处的吸收值
显著下降,而350nm 附近的吸收峰则移至340nm 处。
利用 tnbs 与氨基酸反应的这一特性,可在420nm 处(偏碱性溶液中)或在340nm
(偏酸性溶液中)对氨基酸进行定量测定。下表列出各种氨基酸与tnbs 反应后在不同条
件下测定的吸光度。在340nm 处,各氨基酸的吸收度大致相近,而在420nm 处的吸光度
因氨基酸种类而异;在加入适量so3
2-时,吸收值升高。
本法允许的测定范围是 0.05~0.4μmol 氨基酸。
表 10-3 各种氨基酸与tnbs 反应后在不同条件下测定的吸光度
氨基酸种类 碱性溶液① 酸性溶液加 so3
①取不同含量氨基酸液1ml,加4%nahco3 1ml,0.1%tnbs 1ml,于40℃反应2h,用水补充至4ml,
在420nm 处测定。制作氨基酸浓度—吸光度坐标图,从曲线中求得各氨基酸于1μmol 时的吸光度。
②条件同上,但在与tnbs 反应时加0.01mol/l na2so3 1ml,最后总体积也是4ml,同样在420nm 处
测定。
③条件同①,但与 tnbs 反应后加1mol/l hcl 1ml 酸化,在340nm 处测定。
(六)乙酰丙酮和甲醛荧光法
1.原理
氨基酸与乙酰丙酮和甲醛反应,生成 n-取代基2,6-二甲基-3,5-二乙酰基1,4-二氢吡啶,
产生黄-绿色荧光,可用荧光分析法检测。主要反应如下:
乙酰丙酮 甲醛 氨基酸 荧光物质
2.试剂
混合试剂:取1mol/l 乙酸钠溶液10ml,加入乙酰丙酮溶液0.4ml 和30%甲醛溶液1ml,
用水稀释至30ml。
3.测定
取氨基酸液 1ml,加入混合试剂1ml,用棉花塞满试管口,避光于100℃下加热10min,
冷却,加水2ml,然后测定荧光值。
表 10-4 各种氨基酸的发射波长和检测范围
化合物(激发波长405nm) 发射波长(nm) 检测范围(mg/l)
甘氨酸 485 2~10
苯丙氨酸 490 8~40
丝氨酸 485 5~25
半胱氨酸(盐酸盐) 500 20~100
谷氨酸 485 20~100
与标准相比较求出样品中的氨基酸含量。
二、个别氨基酸的定量测定
(一)赖氨酸的测定
1.原理
用铜离子阻碍游离氨基酸的α-氨基,使赖氨酸的ε-氨基可以自由地与1-氟-2,4 二硝基
苯(fdnb)反应,生成ε-dnp-赖氨酸。经酸化和用二乙基醚提取,在波长390nm 处有吸收峰,
从而求出样品中游离赖氨酸的含量.
2.试剂
(1)氯化铜液:称28.0g 无水氯化铜,用水稀释至1000ml。
(2)磷酸三钠溶液:称68.5g 无水磷酸钠,用水稀释至1000ml。
(3)硼酸盐缓冲液(ph9.1~9.2):称54.64g 带有10 结晶水的四硼酸钠,用水稀释至
1000ml 。
(4)磷酸铜悬浮液:搅拌情况下,把氯化铜液200ml,缓慢倒入400 ml 的磷酸三钠溶液
中,把悬浮液以2000r/min 速度离心5min ,用硼酸盐缓冲液再悬浮沉淀物,洗涤离心3 次,
把最后的沉淀物悬浮在硼酸盐缓冲液中,并用缓冲液稀释至1l。
(5)1-氟-2,4 二硝基苯(fdnb)溶液:吸取fdnb10ml 用甲醇稀释至100ml。
(6)赖氨酸-hcl 标准溶液:称取一定量赖氨酸-hcl,用水配成200mg/l 的工作标准液。
(7)100g/l 丙氨酸溶液。
3.测定
(1)称取通过40 目筛的均匀试样1.00g,置于100ml 烧瓶中。另吸取赖氨酸-hcl 标准工
作液5ml(相当1mg 赖氨酸-hcl),连同试剂空白同时进行试验。
(2)向各烧瓶中加入25ml 磷酸铜悬浮液,然后再加10%丙氨酸1.0ml,振摇15min。吸
取10%fdnb 溶液0.5ml.置于各处理烧瓶中,将烧瓶置沸水中加热15min。
(3)取出烧瓶,立即加入1mol/lhcl 溶液25ml,并不断摇动使之酸化和分散均匀。
(4)烧瓶中的溶液冷却至室温,用水稀释至100ml.取约40ml 悬浮液进行离心。
(5)用25ml 二乙基醚提取上清液3 次,除去醚。并将溶液收集于有刻度试管中,于65℃
水浴中加热15min,以除去残留的醚。并记录溶液的毫升数。
(6)吸取上述各处理液10ml,分别与95%乙醇溶液10ml 混合,用滤纸过滤。
(7)用试剂空白液凋零,测定样液a390nm,与赖氨酸-hcl 标准液对照,求出样品中赖氨
酸-hcl 的含量。
本法在 0~40mg/l 赖氨酸溶液范围内呈良好线性关系。
4.说明
(1)添加一定量的中性氨基酸如丙氨酸,增加总氨基酸的浓度,有助于赖氨酸-hcl 浓度
具有良好的线性关系。
(2)用醚提取酸性溶液,可将所有中性或酸性的dnp-氨基酸衍生物除去,并把fdwb
的产物破坏,否则这些产物在390nm 处存在干扰。
(二)色氨酸的测定
1.原理
样品中的蛋白质经碱水解后,游离的色氨酸与甲醛和含铁离子的三氯乙酸溶液作用,生
成哈尔满化合物(norharman),具有特征荧光值,可以进行定量测定。
2.试剂
(1)0.3mmol/l 三氯化铁-三氯乙酸溶液:称取三氯化铁(fecl3?6h2o)41mg,加入10%三
氯乙酸溶液溶解并定溶至500ml。
(2)2%甲醛:量取甲醛溶液(36%~38%)5.5ml,加水至100ml。
(3)色氨酸标准溶液:称取10mg 色氨酸,用0.1mol/lnaoh 溶液溶解并定容至100ml,
置棕色瓶中备用,使用时用水稀释成1mg/l 的标准溶液.
3.测定
称取样品粉末 100~200mg 于离心管中,加入4ml 乙醚,摇匀后过夜,以3000r/min 速
度离心。将乙醚提取液移入试管内,并用乙醚洗涤残渣3 次,收集乙醚液于试管中,于40℃
水浴除去醚。残留物中加入6.25mol/l n aoh 4ml,火焰封口,于110℃水解16~24h。水
解液用4mol/l hcl 溶液调节至ph6~8 后,用水定容至50ml,过滤备用。
吸取滤液 0.2ml,加入2%甲醛0.2ml 和0.3mmol/l 三氯化铁-三氯乙酸混合液2ml,
摇匀后于100℃水浴中加热1h,取出,冷却后用水定容至10ml。在激发波长为365nm,发
射波长449nm 条件下,测定样品的荧光强度,与色氨酸标样作对照,求出样品中色氨酸含
量。
本法在 0~10mg/l 色氨酸溶液范围内呈良好线性关系。1988年,鲁岐等学者对三七中的氨基酸进行了分析测试,共测得16种氨基酸,其中7种为人体必必需氨基酸,总氨基酸的平均含量为7.73%。